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全自動酶標(biāo)儀的功能介紹及正確使用方法
日期：2024-09-18 13:51
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摘要：全自動酶標(biāo)儀具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實(shí)驗室實(shí)際工作中，實(shí)驗人員在使用全自動酶標(biāo)儀進(jìn)行測定操作時，有時難免會對酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)準(zhǔn)混亂，甚至對酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)生誤解。如酶標(biāo)儀的陽性率較肉眼測定明顯提高。
1、全自動酶標(biāo)儀采用垂直光路多通道（一般為8或12通道，也可單通道）檢測，一般為硅光管或光纖。除了測量通道外，一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器還具有一個參考通道，每次測量都可以進(jìn)行自校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的吸光度范圍、線性、精密度和準(zhǔn)確度可以反映酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能。如果光學(xué)系統(tǒng)良好，上述指標(biāo)應(yīng)該更好。測量的準(zhǔn)確...
全自動酶標(biāo)儀具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實(shí)驗室實(shí)際工作中，實(shí)驗人員在使用全自動酶標(biāo)儀進(jìn)行測定操作時，有時難免會對酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)準(zhǔn)混亂，甚至對酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)生誤解。如酶標(biāo)儀的陽性率較肉眼測定明顯提高。
1、全自動酶標(biāo)儀采用垂直光路多通道（一般為8或12通道，也可單通道）檢測，一般為硅光管或光纖。除了測量通道外，一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器還具有一個參考通道，每次測量都可以進(jìn)行自校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的吸光度范圍、線性、精密度和準(zhǔn)確度可以反映酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能。如果光學(xué)系統(tǒng)良好，上述指標(biāo)應(yīng)該更好。測量的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到測量通道的均勻性。單通道可以避免不同通道造成的差異。
2、 全自動酶標(biāo)儀的波長在400-750nm或800nm之間，可以滿足ELISA的要求。目前國內(nèi)常用的ELISA試劑盒是辣根過氧化物酶（HRP），底物通常是四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD）。在過氧化氫存在下，酶被HRP氧化成2,2,2，二甲基偶氮苯（DAB）和苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有較大吸收。當(dāng)pH值降至l0時，較大吸收波長移到492nm，摩爾消光系數(shù)變大，顏色加深，因此通常用硫酸或鹽酸等強(qiáng)酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物在450nm波長處具有較大的消光系數(shù)。如果HRP小，h:o:TMB過高，就會形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH值可使藍(lán)色陽離子根轉(zhuǎn)化為黃色苯醌，以硫酸為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm是ELISA中常用的兩種方法。所有酶標(biāo)儀均配有放置過濾器的自動轉(zhuǎn)換部件，可同時安裝6-8個過濾器。所有濾光片應(yīng)包括上述兩個波長。一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器用490nm濾光片代替492nm濾光片，影響不大。除這兩種基本濾光片外，考慮到雙波長比色法的需要，還應(yīng)設(shè)有620nm或630nm或650nm和405nm濾光片，其他濾光片可根據(jù)自身需要選擇。有時，一些實(shí)驗室需要使用酶標(biāo)儀進(jìn)行微量生化測定，因此酶標(biāo)儀廠家對酶標(biāo)儀的紫外檢測功能進(jìn)行了擴(kuò)展，需要340nm波長的濾光片。此時酶標(biāo)儀的波長范圍為340-750nm或800nm。
全自動酶標(biāo)儀具有單波長和雙波長檢測功能。有時，用戶不知道在什么情況下使用單波長或雙波長檢測。所謂“單波長”，是用顯色裝置吸收較大的波長，即450nm或492nm進(jìn)行比色測定；用“雙波長”與顯色裝置較大吸收波長450nm或492nm進(jìn)行比色測定，用對特定顯色不敏感的波長630nm進(jìn)行測定。酶標(biāo)打印的終端吸光度是它們之間的差值。在630nm處獲得的吸光度是非特異性的，它是由指紋、灰塵、污垢等的吸收引起的。因此，在ELISA比色法中，建議使用雙波長，不需要空白孔。
3、 測定的吸光度范圍一般為全自動酶標(biāo)儀的吸光度。酶聯(lián)免疫吸附試驗的測定要求在1.5～1之間，早期酶標(biāo)儀測定的吸光度一般在1.5～1之間。在12.5之間，但現(xiàn)在基本上已經(jīng)擴(kuò)大到3.5以上，并能保持良好的精度和線性。例如，labsystems的dragon wellscan MK-2的吸光度為0-3.5，MultiScan ascent的吸光度為0-4.0，線性誤差不大于0-4.0± 2.0%，在吸光度0.3-3.0范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于± 0.2%; 在3.0～4.0abs范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于0.2%。因此，酶標(biāo)儀的吸光度范圍無需刻意追求，主要取決于吸光度在一定范圍內(nèi)的線性和精密度。
4、 酶標(biāo)檢測速度是指完成比色測定所需的時間
我司專注于生命科學(xué)儀器的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售，主要產(chǎn)品有超微量分光光度計，酶標(biāo)板離心機(jī)，微孔板振蕩器等，歡迎廣大客戶前來咨詢！
1、全自動酶標(biāo)儀采用垂直光路多通道（一般為8或12通道，也可單通道）檢測，一般為硅光管或光纖。除了測量通道外，一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器還具有一個參考通道，每次測量都可以進(jìn)行自校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的吸光度范圍、線性、精密度和準(zhǔn)確度可以反映酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能。如果光學(xué)系統(tǒng)良好，上述指標(biāo)應(yīng)該更好。測量的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到測量通道的均勻性。單通道可以避免不同通道造成的差異。
2、 全自動酶標(biāo)儀的波長在400-750nm或800nm之間，可以滿足ELISA的要求。目前國內(nèi)常用的ELISA試劑盒是辣根過氧化物酶（HRP），底物通常是四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD）。在過氧化氫存在下，酶被HRP氧化成2,2,2，二甲基偶氮苯（DAB）和苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有較大吸收。當(dāng)pH值降至l0時，較大吸收波長移到492nm，摩爾消光系數(shù)變大，顏色加深，因此通常用硫酸或鹽酸等強(qiáng)酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物在450nm波長處具有較大的消光系數(shù)。如果HRP小，h:o:TMB過高，就會形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH值可使藍(lán)色陽離子根轉(zhuǎn)化為黃色苯醌，以硫酸為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm是ELISA中常用的兩種方法。所有酶標(biāo)儀均配有放置過濾器的自動轉(zhuǎn)換部件，可同時安裝6-8個過濾器。所有濾光片應(yīng)包括上述兩個波長。一些酶標(biāo)準(zhǔn)儀器用490nm濾光片代替492nm濾光片，影響不大。除這兩種基本濾光片外，考慮到雙波長比色法的需要，還應(yīng)設(shè)有620nm或630nm或650nm和405nm濾光片，其他濾光片可根據(jù)自身需要選擇。有時，一些實(shí)驗室需要使用酶標(biāo)儀進(jìn)行微量生化測定，因此酶標(biāo)儀廠家對酶標(biāo)儀的紫外檢測功能進(jìn)行了擴(kuò)展，需要340nm波長的濾光片。此時酶標(biāo)儀的波長范圍為340-750nm或800nm。
全自動酶標(biāo)儀具有單波長和雙波長檢測功能。有時，用戶不知道在什么情況下使用單波長或雙波長檢測。所謂“單波長”，是用顯色裝置吸收較大的波長，即450nm或492nm進(jìn)行比色測定；用“雙波長”與顯色裝置較大吸收波長450nm或492nm進(jìn)行比色測定，用對特定顯色不敏感的波長630nm進(jìn)行測定。酶標(biāo)打印的終端吸光度是它們之間的差值。在630nm處獲得的吸光度是非特異性的，它是由指紋、灰塵、污垢等的吸收引起的。因此，在ELISA比色法中，建議使用雙波長，不需要空白孔。
3、 測定的吸光度范圍一般為全自動酶標(biāo)儀的吸光度。酶聯(lián)免疫吸附試驗的測定要求在1.5～1之間，早期酶標(biāo)儀測定的吸光度一般在1.5～1之間。在12.5之間，但現(xiàn)在基本上已經(jīng)擴(kuò)大到3.5以上，并能保持良好的精度和線性。例如，labsystems的dragon wellscan MK-2的吸光度為0-3.5，MultiScan ascent的吸光度為0-4.0，線性誤差不大于0-4.0± 2.0%，在吸光度0.3-3.0范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于± 0.2%; 在3.0～4.0abs范圍內(nèi)，精密度的變異系數(shù)小于0.2%。因此，酶標(biāo)儀的吸光度范圍無需刻意追求，主要取決于吸光度在一定范圍內(nèi)的線性和精密度。
4、 酶標(biāo)檢測速度是指完成比色測定所需的時間
我司專注于生命科學(xué)儀器的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售，主要產(chǎn)品有超微量分光光度計，酶標(biāo)板離心機(jī)，微孔板振蕩器等，歡迎廣大客戶前來咨詢！